Ląstelių auginimo terpė yra maistinė medžiaga, skirta dirbtinai imituoti gyvūnų ląstelių augimo aplinką in vivo ir palaikyti ląstelių išlikimą bei dauginimąsi in vitro. maistinė medžiaga. Taigi, kokios yra dažniausios problemos, su kuriomis susiduriama naudojant ląstelių kultūros terpę? Padarykime analizę.
1. Buferinės sistemos parinkimas ir ląstelių auginimo terpės pH pokytis
Kadangi daugumos ląstelių optimalus pH yra nuo 7.{1}} iki 7,4, nukrypimai nuo šio diapazono gali turėti žalingą poveikį ląstelių augimui. Tačiau įvairių ląstelių pH reikalavimai nėra visiškai vienodi. Pirminės kultivuotos ląstelės paprastai blogai toleruoja pH svyravimus, o begalinės ląstelių linijos turi stiprią toleranciją. Todėl pirminėje kultūroje svarbesnė yra buferio sistema auginimo terpėje. Bendrojoje ląstelių auginimo terpėje naudojama subalansuota druskų sistema, tačiau skirtingose auginimo terpėse arba toje pačioje auginimo terpių serijoje naudojamos skirtingos subalansuotos druskos sistemos. Pavyzdžiui, 199 serijos ir MEM serijos turi Hankso sistemos auginimo terpę ir Earle sistemos kultūrą. bazė. Kai kurios terpės nėra aukščiau paminėtos įprastinės subalansuotos druskos sistemos, pvz., RPMI1640 terpė, F12 terpė. MEM žemo serumo terpės subalansuotų druskų sistema taip pat nėra įprasta subalansuotų druskų sistema, o subalansuotos druskos sistemos buferinis pajėgumas yra stipresnis nei įprastos subalansuotos druskos sistemos.
ląstelių kultūros
Yra daug priežasčių, kodėl ląstelių auginimo metu sumažėja pH. Kai ląstelės auga labai greitai, pH vertė paprastai greitai krenta, o tai gali būti išspręsta laiku paskirstant, padidinant pasėjimo santykį arba sumažinant serumo tūrį. Be to, dėl per daug priveržto kultūros buteliuko dangtelio, nepakankamo NaHCO3 buferio sistemos buferinio pajėgumo, netinkamos druskos koncentracijos auginimo terpėje, bakterijų, mielių ar grybelių užteršimo taip pat dažnai gali greitai nukristi pH. Šiuo metu galite ją išspręsti šiais būdais:
1) Padidinkite NaHCO3 koncentraciją auginimo terpėje arba sumažinkite CO2 koncentraciją inkubatoriuje. Kai NaHCO3 kiekis yra nuo 20 g/l iki 3,7 g/L, atitinkama CO2 koncentracija yra 5–10 procentų;
2) Perjungti į CO2-nepriklausomą auginimo terpę;
3) Tinkamai atsukite buteliuko dangtelį. Į auginimo terpę įpilkite HEPES buferio, kad galutinė koncentracija būtų 10-25 mM;
4) Naudoti kultūrinį tirpalą Erlo druskos pagrindu CO2 kultūros aplinkoje, o Hankso druskos paruoštą kultūros tirpalą atmosferinėje kultūros aplinkoje;
5) Išmeskite kultūrą arba sterilizuokite antibiotikais, jei priežastis yra užteršimas.
2. Ląstelių kultūros terpėse dažniausiai naudojami keli svarbūs priedai ir problemos, į kurias reikėtų atkreipti dėmesį naudojimo procese
Fenolio raudonasis naudojamas kaip pH indikatorius ląstelių auginimo terpėje. Apskritai, terpės pH vertė gali būti vertinama pagal fenolio raudonojo indikacinį poveikį, tačiau fenolio raudonojo kiekis žemo serumo arba be serumo ląstelių auginimo terpėje skiriasi nuo įprastoje ląstelių auginimo terpėje ir jo negalima stebėti. plika akimi arba pH reikšmė nustatoma empiriškai, o matavimui rekomenduojama naudoti pH metrą. Fenolio raudonasis paprastai neturi reikšmingos įtakos biologinių produktų, gaminamų serumo turinčiose ląstelių auginimo terpėse, kokybei, taip pat gali būti pašalintas naudojant gryninimo metodus, tačiau fenolio raudonasis gali sukelti intracelulinį natrio ir kalio disbalansą ląstelių auginimo terpėje be serumo. , turinčios įtakos ląstelių augimui.
ląstelių kultūros plokštelė
Natrio bikarbonatas daugiausia naudojamas kaip buferinė sistema ląstelių auginimo terpėje, taip pat reguliuoja osmosinį slėgį. Paprastai produkto naudojimo instrukcijoje rekomenduojamas natrio bikarbonato kiekis yra standartinis ir saugus kiekis, kuris gaunamas remiantis praktine patirtimi ir moksliškai. Tačiau dėl skirtingų ląstelių linijų (štamų) ta pati ląstelė gali prisitaikyti prie skirtingos aplinkos (skirtinga ląstelių tolerancija ir pan.), taip pat yra regioninių vandens kokybės skirtumų ir pan., kurie taip pat gali būti šiek tiek pakeisti gaminant faktinę gamybą. procesą, bet naudoti Tie, kuriems reikia atlikti atitinkamus tyrimus (fizikinius ir cheminius bei ląstelių gamybos tyrimus ir kt.).
HEPES yra nejoninis buferis, turintis gerą buferinį pajėgumą pH intervale nuo 7,2 iki 7,4 ir gali būti toksiškas kai kurioms ląstelėms esant didelėms koncentracijoms. HEPES buferis gali būti naudojamas su mažu natrio karbonato kiekiu (0,34 g/L), kad būtų kompensuotas osmosinio slėgio padidėjimas, kurį sukelia papildomo HEPES. Jo saugi koncentracijos diapazonas yra 10–25 mmol/l.
Natrio piruvatas gali būti naudojamas kaip alternatyvus anglies šaltinis ląstelių kultūroje, ir nors ląstelės renkasi gliukozę kaip anglies šaltinį, ląstelės taip pat gali metabolizuoti natrio piruvatą, kai nėra gliukozės.
Glutaminas tirpale yra labai nestabilus. Jis gali būti suskaidytas iki 50 procentų 4 laipsnių temperatūroje 1 savaitę. Geriausia jį paruošti atskirai naudojant, laikyti -20 laipsnių šaldytuve ir prieš naudojimą supilti į ląstelių auginimo terpę.
