žinduolių ląstelių kultūros procesas
Žinduolių ląstelės eina per audinių ekstrahavimo, pirminės kultūros ir subkultūros procesą. Subkultūra gali būti suskirstyta į ląstelių linijų kultūrą ir ląstelių linijų kultūrą pagal sąlygas. Kiekvienas procesas trumpai apibūdinamas taip:
Pirminė kultūra: Pašalinus audinį iš gyvūno, jis yra smulkinamas, apdorojamas įvairiais fermentais (paprastai tripsinu), chelatiniais agentais (paprastai EDTA) ir mechaniniais metodais (pakartotinis aspiracija ir pipetės pūtimas), o po to išsklaidytas į atskiras ląsteles, auginamas atitinkamoje terpėje, kuri leidžia ląstelėms išgyventi, augti ir daugintis. Pirminė ląstelių kultūra paprastai reiškia ląstelių kultūrą per 10 ištraukų po to, kai ląstelės pašalinamos iš gyvūno.
Po pirminės ląstelių kultūros, ląstelių dalijimosi ir reprodukcijos kultūra palaipsniui didėja, augimas užpildo kultūros erdvę, o tada liečiasi tarpusavyje, todėl kontaktų slopinimas, o augimo greitis palaipsniui sulėtėja ar net sustoja. Jis turi būti iš naujo pasėtas į naujas subkultūros kultūros kolbas.
Pasyvavimas (ištraukimas): Pirminės ląstelės išimamos iš kultūros kolbos, paruošiama ląstelių suspensija ir padalijama į dvi ar daugiau kultūros kolbų tolesnei kultūrai, kuri vadinama subkultūra.
Ląstelių linija: ląstelių linija yra ląstelių linija po pirmojo pirminės kultūros perėjimo. Jei ląstelių linijos išgyvenimo laikas yra ribotas, jis vadinamas baigtine ląstelių linija. Ląstelių linija, kuri įgyja neribotą reprodukcinį pajėgumą ir toliau išgyvena, vadinama nuolatine ląstelių linija arba begaline ląstelių linija.
Ląstelių linija: Iš biologiškai identifikuotų ląstelių linijų ląstelių populiacija, kurią sudaro vienos ląstelės izoliavimas, kultūra ar atranka, vadinama ląstelių linija. Tada skirtingų formų ląstelių populiacijos izoliuojamos ir kultivuojamos iš pirminės ląstelių linijos, kad susidarytų subklono.
Žinduolių ląstelių kultūros sąlygos
Skirtingoms žinduolių ląstelėms kiekviename etape reikalingos pagrindinės kultūros sąlygos
1. Sterili ir netoksiška aplinka: kultūros terpės ir visos kultūros įrangos aseptinis apdorojimas; antibiotikų pridėjimas į kultūros terpę, kad būtų išvengta užteršimo kultūros proceso metu; reguliariai keisti kultūros terpę, kad būtų pašalinti metabolitai, kad būtų išvengta kultivuotų ląstelių pažeidimo.
2. Mityba: Skystoje sintetinėje terpėje yra cukrų, amino rūgščių, augimą skatinančių veiksnių, vandens, neorganinių druskų, mikroelementų ir kt. Paprastai būtina pridėti natūralių komponentų, tokių kaip plazma ir serumas.
3. Tinkama temperatūra ir pH vertė: Optimali žmogaus ir žinduolių ląstelių temperatūra yra 36±0,5 °C. Tinkama pH vertė yra 7,2-7,4.
4. Dujų aplinka: Dujų aplinka paprastai yra "95% oro + 5% anglies dioksido" mišrios dujos. Deguonis yra dujos, reikalingos ląstelių metabolizmui, o anglies dioksidas palaiko terpės pH.
