Ląstelių kultūros plokštelės yra dažniausiai naudojamos ir svarbios eksploatacinės medžiagos ląstelių kultūros eksperimentuose, nes jos gali sutaupyti laiko ir reagentų medžiagų, skirtų ląstelių eksperimentams, ir vienu metu gali nustatyti kelis dinaminius kintamuosius, kad būtų lengviau stebėti ir aptikti.
kultūros plokštelė
1. 96, 24-šulinėlių kultūros lėkštelių ar Petri lėkštelių dangteliai yra labai laisvi, todėl patogu vėdinti, bet ar taip pat nepaslys bakterijos, pelėsiai ir kiti teršalai?
Atsakymas: (1) Viršelis labai laisvas ir priklauso pusiau atvirai kultūrai. Jo tikslas yra kvėpuoti (iš tikrųjų, kad CO2, esantis už auginimo lėkštelės, visiškai pasikeistų su kultivavimo inde, kad būtų išlaikyta terpės pH vertė).
(2) Yra privalumų ir trūkumų, o tai padidina taršos galimybę. Be to, dėl to Petri lėkštelėje esantis skystis išgaruoja, o tai pasižymi tiksliu vaistų dozavimu. Taigi būtinos dvi šios priemonės:
a) Oras inkubatoriuje turi būti švarus (reguliari ultravioletinė šviesa, šveitimas alkoholiu, o inkubatorius turi būti kuo mažiau įjungtas ir išjungtas)
b) Drėgmė inkubatoriuje visą laiką turi būti palaikoma 100 procentų (kriauklė, kurioje į inkubatorių dedamas sterilus distiliuotas vanduo). Atkreipkite dėmesį į aseptinį darbą!
2. Mano ląstelės pasėjamos ant kultūros plokštelės, o ląstelės visada susirenka periferinėje dalyje. Ką turėčiau daryti? Matau, kad viduryje susibūrusios kai kurių bendražygių kameros. Ar tai yra plokštės kokybės problema?
A: Kaip sumaišote savo ląsteles? Ar tai pipete pučiama ar purtoma kultūros plokštelė? Jei tai yra pastaroji, ir ji suplakama ratu, labai tikėtina, kad ląstelės dėl išcentrinės jėgos bus išmestos į aplinkinę dalį, todėl ląstelės bus viduryje. Mažiau, daugiau nei keturios savaitės! Galite išbandyti patys!
Geras būdas: prieš kultivuodami sėklų lėkštę, įdėkite ją į inkubatorių kelioms valandoms prisotinti ir tada išimkite. Sėjant ląsteles, jėga turi būti nedidelė. Galite naudoti lašintuvą, esantį kultūros plokštelės angos šone. Lėtai pridėkite, kad ląstelių suspensija patektų į plokštelės šulinukus ir kultivuojamos ląstelės augtų iš esmės tolygiai. Nepamirškite niekada nepurtyti osciliatoriaus, nes jūsų ląstelės sulips, kaip sakėte.
3. Mano ląstelės paskirstomos normaliai, bet kai vienas tipas patenka į šešių šulinėlių plokštelę (nepriklausomai nuo vaisto pridėjimo ir kontrolės), visada yra dviejų ar trijų šulinių (atsitiktinės) ląstelės, kurios blogai auga, yra mažos ir atrodo kad būtų sulaužytas. Ar kas nors su tuo susidūrė? Kokia priežastis?
A: Tai gali būti susiję su įpilamo skysčio temperatūra. Jei jūsų ląstelės ką tik buvo paimtos pakeisti terpę ir pridėti terpę, o terpė taip pat netrukus išimama iš 4 laipsnių šaldytuvo, ląstelės gali lengvai užšalti. Pirmiausia rekomenduojama terpę inkubatoriuje geriausiai inkubuoti 15 min.
Be to, tai taip pat yra susijusi su jūsų ląstelių augimo būsena. Ląstelės prieš dozavimą gali būti inkubuojamos su didelėmis serumo koncentracijomis. Įsitikinkite, kad ląstelės yra geros būklės.
Arba jis gali būti inkubuojamas 37-laipsnio vandens vonioje, arba pačios kultūros plokštelės problema, galite pabandyti kitą kultūrinę lėkštę. Kita galimybė yra ląstelių būsenos problema, koreguokite serumo koncentraciją sėjant plokštelę.
4. Pastarosiomis dienomis ląstelėms pasėti naudojau šešių šulinėlių kultūros plokštelę. Po 24 valandų kultivavimo pakeičiau terpę. Prieš keisdamas terpę, pastebėjau, kad ląstelės prilipo prie sienelės, o būklė buvo labai gera. Pakeitęs terpę, iš karto panaudojau mikroskopą. Pastebėta, kad beveik pusė ląstelių kiekviename šulinyje buvo beveik mirčiai. Ląstelės tampa labai mažos ir gamina daug šiukšlių, o kita ląstelių pusė yra normali, tarp nenormalių ir normalių ląstelių yra takoskyra, viršutinė apskritimo pusė yra gera, apatinė apskritimo pusė nėra gera, kaip yra tai? Kas nutiko?
A: Galite pamatyti, ar yra kuri nors iš toliau nurodytų priežasčių
a. Kultūros plokštelė nededama horizontaliai;
b. Kaip apie jūsų auginimo terpę, jei baigiasi auginimo terpės galiojimo laikas, ląstelės neprilips. Išbandykite ką tik paruoštą terpę
c. Tai gali būti plokštės problema. Pakeisti kitos prekės ženklo plokštelę ar naudoti kultūros buteliuką nėra problemų.
d. Ar atkreipėte dėmesį į ventiliatoriaus įtaką keičiant terpę, ypač kai yra daug kultūrinių plokštelių, kurias reikia pakeisti, dėl vėjo ir vandens praradimo nesunku sukelti ląstelių susitraukimą ir plyšimą. Jei taip, terpė turėtų būti keičiama po vieną, ir nebijokite švaistyti pipetės, atkreipkite dėmesį į operacijos efektyvumą!
5. Praėjo keturios dienos nuo tada, kai ląstelės buvo suardytos ir pasėtos į 24-šulinėlių plokštelę, o kiekvienos šulinėlio vidurinė dalis visada buvo pilna. Terpė buvo plaunama PBS kiekvieną dieną, ta pati situacija susiklostė ir kitą dieną keičiant terpė. Kraštai gerai ilgi, o centras pilnas negyvų ląstelių?
Atsakymas: jei ląstelės yra tankios aplink ir retos viduryje, yra maždaug šių priežasčių:
Terpės pridėta per mažai. Daugiausia dėl skysčio įtempimo problemos.
ar inkubatoriaus apačioje yra mažiau vandens;
Kratymas po ląstelių sėjimo buvo per didelis. Ląstelės pasiskirsto aplinkui dėl išcentrinės jėgos.
Raktas į tai, ar ląstelės yra tolygiai paskirstytos, yra tai, kad kiekvienas ląstelių tipas turi individualių skirtumų, o kitų žmonių ląstelės gali jums netikti. Taigi jūs turite tyrinėti patys ir rasti taisyklių rinkinį, būdingą tik jūsų ląstelėms. Turite tokią patirtį:
(1) Visos sėjamos ląstelių suspensijos prieš sėjant turi būti sumaišytos pipete.
(2) Remiantis įrašais, 24-šulinėlio plokštelės skysčio tūris yra 1 ml, iš tikrųjų pakanka 1 ml tūrio.
(3) Inokuliuodami mėginį įpilkite lėtai ir nepamirškite šiek tiek pasukti pipetės galiuko. Mėginio negalima pridėti per greitai, kad ląstelės nesikauptų viename mėginio pridėjimo taške, ir atkreipkite dėmesį į mėginių pridėjimą skirtingose dalyse, ty pridėdami kilnojamąjį pistoletą. Galva, dirbtinai padarykite, kad ląstelės būtų tolygiai paskirstytos. Taip ląstelės pasiskirsto tolygiai.
