Ląstelių formavimas apima ląstelių injekcijos, formavimo ir gavimo etapus. Ląstelių kultūros kolboje esančios ląstelės turi tam tikru mastu augti ir vystytis. Šiuo metu būtina pasikliauti tripsinu, kad suvirškintų ląsteles ant išorinės kolbos sienelės ir tada pajustumėte. Esant fermentams, virškinimo laikas turi būti kontroliuojamas.
T75 ląstelių kultūros kolba
Tripsinas priklauso kitai tripsino klasei, kuri gali skaidyti baltymus ant ląstelių membranų, sujungtų su ląstelių kultūros kolbomis. Ištirpinus atitinkamoje dalyje esantį baltymą, baltymų sandūroje esantis baltymas ištirpsta, o ląstelė dėl savo vidinės struktūros ląstelės karkaso atramos jėgos tampa sferine, taip atskiriant ląsteles. Tripsino virškinimo lygis yra pagrindinis veiksnys formuojant ląsteles: per didelis virškinimas padidina ląstelių nuolaužas, padaugėja juodųjų šiukšlių, ląstelės nukris kaip visuma, o tai kelia rimtą pavojų ląstelių gyvybingumui, o kai kurios ląstelės plūduriuoja, o tripsino ištekėjimas išmetamas; jei virškinimas nepakankamas, ląstelėms sunku nupūsti nuo vidinės buteliuko sienelės, o nuolatinis pūtimas ir plakimas taip pat pakenks ląstelių veiklai.
ląstelių kultūros kolba
Serumo baltymų kultūros tirpalo buteliukas
Skirtingose įstaigose ar ląstelėse kasos fermentų poveikis nėra vienodas. Kasos fermentų išsklaidytų ląstelių aktyvumas taip pat susijęs su jo koncentracijos verte, temperatūra ir poveikio trukme. Kai pH yra 8.{1}} ir temperatūra 37, kasos fermento vandeninio tirpalo veiksmingumo lygis yra gana stiprus. Naudojant tripsiną, jo koncentracija, temperatūra ir trukmė turi būti gerai kontroliuojami, kad būtų išvengta ląstelių pažeidimo dėl pernelyg didelio virškinimo. Kadangi Ca2, Mg2 ir serumo baltymai, baltymų gramai mažina pankreatino aktyvumą, todėl ruošdami vandeninį pankreatino tirpalą naudokite BSS be Ca2, Mg2, pvz.: D-Hankso tirpalą. Sustabdžius virškinimą, tripsino vartojimą galima sustabdyti naudojant serumo baltymų ląstelių auginimo terpę arba tripsino lėtintuvą, kad būtų sustabdytas tripsino poveikis ląstelėms.
kultūrinė kolba
T25 ląstelių kultūros kolba
Be to, jei tai naujai įsigyta ląstelė, galite naudoti mažesnę tripsino koncentraciją, kad pirmiausia ištirtumėte virškinimo laiką ir stebėtumėte, ar ląstelės tampa apvalios kas minutę, ir gerai užfiksuoti. Apskritai, gaunant ląsteles ląstelių kultūros kolboje, būtina kontroliuoti tripsinizacijos laiką, kad būtų veiksmingai išlaikytas ląstelių gyvybingumas.
