PGR aptikimas
Polimerazės grandininė reakcija (PGR) naudoja DNR gabalėlį kaip šabloną, o dalyvaujant DNR polimerazei ir nukleotidų substratui, DNR amplifikuojama iki pakankamo kiekio struktūrinei ir funkcinei analizei. PGR nustatymo metodas turi itin didelę reikšmę klinikinėje greitoje bakterinių infekcinių ligų diagnostikoje.
PGR principas naudojamas amplifikuoti DNR fragmentą, esantį tarp dviejų žinomų sekų, panašiai kaip natūralios DNR replikacijos procesas. Amplifikuojama DNR molekulė naudojama kaip šablonas, o kaip pradmenys naudojama oligonukleotidų fragmentų pora, papildanti šablono 5' galą ir 3' galą. Veikiamas DNR polimerazės, jis seka šabloną pagal pusiau rezervuotą replikacijos mechanizmą. Grandinės pratęsimas iki naujos DNR sintezės pabaigos, pakartokite šį procesą, tikslinis DNR fragmentas gali būti amplifikuotas.
(PGR) yra specifinių DNR fragmentų fermentinio sintezės in vitro metodas. Jį sudaro keli aukštos temperatūros denatūravimo, žemos temperatūros atkaitinimo ir tinkamo temperatūros pratęsimo etapai. Tokios funkcijos kaip didelis jautrumas, paprastas valdymas ir laiko taupymas. Jis gali būti naudojamas ne tik atliekant fundamentinius tyrimus, tokius kaip genų išskyrimas, klonavimas ir nukleorūgščių sekų analizė, bet ir diagnozuojant ligas ar bet kurioje vietoje, kur yra DNR ir RNR. Polimerazės grandininė reakcija (sutrumpintai polimerazės grandininė reakcija, PCR) taip pat žinoma kaip molekulinis klonavimas be ląstelių arba specifinė DNR sekos in vitro pradmenų nukreipta fermentinės amplifikacijos technologija.
Pusiau rezervuota DNR replikacija yra svarbus biologinės evoliucijos ir perėjimo būdas. Dvigrandė DNR gali būti denatūruota ir sulydoma į vieną grandinę, veikiant įvairiems fermentams. Dalyvaujant DNR polimerazei ir promotoriui, dvigrandė DNR gali būti replikuojama į tas pačias dvi molekules pagal komplementarios bazių poros principą. Eksperimentų metu buvo nustatyta, kad DNR taip pat gali būti denatūruojama ir ištirpsta aukštoje temperatūroje, o nukritus temperatūrai, ji vėl gali būti renatūruota į dvigubas grandines. Todėl, kontroliuojant DNR denatūravimą ir renatūravimą per temperatūros pokyčius ir projektuojant pradmenis kaip promotorius, pridedant DNR polimerazę ir dNTP, galima užbaigti specifinių genų replikaciją in vitro.
Paprasčiausias dalykas yra naudoti specialią įrangą, naudoti dNTPS, Mg2+, specifinius pradmenis, DNR polimerazę ir buferinę sistemą, pridėti šabloną, kuris yra DNR mėginys in vitro amplifikacijai, ir atlikti elektroforezę. Jei jį galima sustiprinti, o sustiprinto produkto dydis atitinka tikslinę juostą, tai reiškia, kad pradmenys ir šablonas yra specifiniai, o aptikimo indeksas yra teigiamas.
PGR nukleorūgščių nustatymo metodai ir žingsniai
Nukleino rūgščių tyrimui atlikti reikalingi penki etapai: mėginių ėmimas, mėginio sulaikymas, sulaikymas, nukleorūgščių ekstrahavimas ir kompiuterinis tyrimas.
Nukleino rūgščių aptikimas
Pirmiausia reikia surinkti žmogaus išskyras ir išvalyti nosies ertmę arba užpakalinę ryklės sienelę bei dvišales ryklės tonziles nosies arba ryklės tyrimu.
Antrame etape medicinos personalas išlaikė mėginį, įmerkė bandinio galvutę į ląstelių konservavimo tirpalą, o nulaužęs uodegą iškart užsuko mėgintuvėlio dangtelį.
Trečioje dalyje mėginį įdėkite į sandarų maišelį, pasilikite ir laiku nusiųskite apžiūrėti.
Ketvirtasis žingsnis – mėginio siuntimas į laboratoriją nukleino rūgščiai ekstrahuoti.
Penktajame etape ekstraktui taikoma fluorescencinė PGR amplifikacijos reakcija.
Taip pat reikia kai kurių eksploatacinių medžiagų ir įrankių
Pridėtas PGR instrumentas, PGR vamzdelis, pipetės antgalis, gilaus šulinio plokštelė, rezervuaras ir reagentai
