Polimerazės grandininė reakcija (PGR) yra vienas iš labiausiai žinomų metodų gyvosios gamtos mokslų laboratorijose.
PGR plokštės yra pagamintos iš pirmos klasės plastiko, kad būtų galima puikiai apdoroti ir analizuoti surinktus mėginius ar rezultatus.
Jie turi plonas, vienodas sienas, užtikrinančias tikslų šilumos perdavimą.
Ruošiantis naudoti realiuoju laiku, mažos DNR arba RNR frakcijos išskiriamos ir saugomos PGR plokštelėse.
PGR plokštės yra labai efektyvios karščio sandarinimui ir taip pat riboja šilumos srautą.
Tačiau, kadangi PGR plokštės yra veiksmingos ir patikimos, jose gali atsirasti klaidų ir netikslumų apdorojant mėginius.
Taigi, jei jus domina geros kokybės PGR plokštelės. Geriausia kreiptis į patikimą PGR plokštelių gamintoją. Taip galite būti tikri, kad gausite geriausią kainą.
Toliau pateikiamos kelios atsargumo priemonės, kurios padės išvengti reagentų ar mėginių užteršimo ir išvengti netikslių rezultatų.
Dezinfekuokite aplinką
Neteisingi teigiami arba neigiami rezultatai dėl priemaišų gali priversti jus suabejoti rezultatais.
Priemaišos ir teršalai būna įvairių formų, pavyzdžiui, nesusijusių DNR arba cheminių priedų, kurie galiausiai sumažina reakcijos efektyvumą ir efektyvumą.
Yra daug būdų, kaip žymiai sumažinti PGR plokštelių užteršimo greitį.
Sterilizuotų filtrų antgalių naudojimas yra dar vienas naudingas būdas užkirsti kelią priemaišoms patekti į mėginį per pipetę.
Specialiai PGR naudojimui pateikiamas visiškai švarus įrangos rinkinys, įskaitant pipetes ir stovus. Tai garantuos nedidelį priemaišų ar teršalų pernešimą po laboratoriją.
Norėdami nuvalyti užterštumą, naudokite baliklį, etanolį ant pipečių, lentynų ir suolų.
Paskirkite rezervuotą erdvę visoms PGR reakcijoms, kad dar labiau sumažintumėte dalelių užterštumą.
Kiekviename žingsnyje naudokite švarias pirštines ir jas dažnai keiskite.
PGR plokštelė
Patikrinkite šablono koncentraciją ir grynumą.
Turėtų būti išlaikytas stendų ir įrangos, naudojamos mėginiams analizuoti naudojant PGR, švara. Prieš analizę ir apdorojimą labai svarbu patikrinti mėginių grynumą.
Paprastai analizatorius atsižvelgia į DNR mėginio koncentraciją ir grynumo lygį.
260 nm/280 nm absorbcijos santykis turi būti ne mažesnis kaip 1,8. Tada priemaišos buvo identifikuotos naudojant bangos ilgius nuo 230 nm iki 320 nm.
Viename pavyzdyje chaotropinės druskos ir kiti organiniai junginiai buvo aptikti esant 230 nm absorbcijai. Tuo pačiu metu aptikti ir patikrinti DNR mėginių drumstumą esant absorbcijai esant 320 nm.
Venkite perkrauti PGR plokšteles ir produktus
Nors pageidautina vienu metu naudoti kelis produktus, tai gali sukelti kryžminį PGR plokštelių užteršimą.
Perkrauti PGR plokšteles skirtingais produktais yra švaistoma ir sunku identifikuoti mėginius.
Tvarkykite PGR reagentų alikvotinių dalių įrašus
Nuolatiniai užšaldymo / atšildymo ciklai ir dažnas alikvotinių dalių naudojimas gali sugadinti PGR reagentus, fermentus ir DNTP dėl perkristalizavimo.
Visada stenkitės stebėti alikvotinių dalių kiekį, naudojamą ruošdami mėginius analizei.
Pageidautina LIMS labiau tinka kontroliuoti atsargas ir reagentų bei mėginių kiekius, kuriuos reikia užšaldyti arba atšildyti.
Pasirinkite optimalią atkaitinimo temperatūrą.
Netinkamos atkaitinimo temperatūros pasirinkimas ir naudojimas yra dar vienas būdas, kuriuo PGR rezultatuose yra klaidų.
Kartais atsakymas vyksta ne taip, kaip planuota. Atkaitinimo temperatūra turi būti sumažinta, kad reakcija būtų sėkminga.
Tačiau sumažinus temperatūrą padidėja klaidingų teigiamų rezultatų ir pradmenų-dimerų tikimybė.
Naudojant PGR plokštes, svarbu patvirtinti lydymosi kreivės analizę, nes tai yra geras rodiklis renkantis tinkamą atkaitinimo temperatūrą.
Grunto projektavimo programinė įranga padeda projektuoti, užtikrina tinkamą atkaitinimo temperatūrą ir tiesiogiai sumažina PGR plokštelių klaidas.
pcr plokštė